產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2×P6 High-Fidelity Premix 是將 PCR 反應(yīng)用到的超保真 P6 DNA 聚合酶、buffer、dNTP Mixture 以及穩(wěn)定劑以 2
倍的終濃度進(jìn)行混合。使用時(shí)，只需在制品溶液中加入模板和引物便可進(jìn)行 PCR反應(yīng)，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，
降低了 PCR操作過(guò)程中污染的可能性。P6 High-Fidelity DNA Polymerase 是基于 Pyrococcus furiosus 的高溫 DNA
聚合酶，具有耐熱型 5′
-3′ 的聚合酶活力以及 3′
-5′的核酸外切酶活力，因此屬于高保真 DNA 聚合酶（其保真度
達(dá)到普通 Taq 酶的 55 倍）。該酶經(jīng)過(guò)生物工程改造后，其擴(kuò)增能力、保真度都得到極大提升，并且具有廣泛
的模板適應(yīng)性，擴(kuò)增速度達(dá)到 2-4 kb/min。優(yōu)化的 Premix 針對(duì) λ DNA 等簡(jiǎn)單模板的有效擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá) 40 kb，
cDNA 有效擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá) 15 kb，基因組有效擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá) 20 kb。
| 產(chǎn)品組成 |
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| 無(wú)染料 |
21805-01 |
21805-02 |
21805-03 |
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| 2×P6 High-Fidelity Premix |
1 mL |
10× 1 mL |
50 mL(21805-2 × 5) |
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| Loading buffer |
1 mL |
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預(yù)混液應(yīng)置于-20 ℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品質(zhì)控
（1）性能檢測(cè) 1：
在 50 μL PCR 反應(yīng)體系加入 25 μL premix、100 ng Human RP11 13M9-pBACe3.6 質(zhì)粒，擴(kuò)增 15 kb 的 DNA
目的片段，在 30 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增后經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠檢測(cè)可在 15 kb 處檢測(cè)到非常亮且單一的目的條帶。
（2）性能檢測(cè) 2：
在 50 μL PCR 反應(yīng)體系加入 25 μL premix、大腸桿菌菌落，擴(kuò)增 5 kb 的 DNA 目的片段，在 30 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增后經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠檢測(cè)可在 5 kb 處檢測(cè)到較亮的單一目的條帶。
（3）大腸桿菌核酸殘留檢測(cè)：
在 20 μL 熒光定量 PCR 反應(yīng)體系加入 10 μL premix（無(wú)染料）和大腸桿菌特異基因擴(kuò)增引物（如 gapA）；在不加入大腸桿菌 DNA 模板的情況下，20 個(gè)循環(huán)內(nèi)熒光信號(hào)值在基線范圍。
常規(guī) PCR 反應(yīng)體系：
1，在冰浴上設(shè)置 PCR 反應(yīng)（供參考）*：
模板: < 500 ng
2 × P6 High-Fidelity Premix: 25 μL Primer 1/2: 0.2 - 1.0 μM (final conc.)
滅菌蒸餾水 Up to 50 μL
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2，PCR 反應(yīng)參數(shù)（供參考）**：
(起始變性): 95 ℃ 5 min
(解鏈): 95 ℃ 30 sec
(退火): 55 ℃ 30 sec
(延伸): 72 ℃ x min （30-35 循環(huán)：2 kb/min）
(最終延伸): 72 ℃ 7 min
(臨時(shí)保存): 16 ℃ 保溫
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* 針對(duì)不同類型的模板，所需的模板量會(huì)有不同，如基因組和質(zhì)粒，等等；需要根據(jù)實(shí)際情況，添加合適的模板量。** 退火溫度需根據(jù)引物和模板實(shí)際的 G+C 含量來(lái)作調(diào)整。
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